今天咱們來分享一篇有關組織餅（Cellblock)製造手藝的文章，適合用簡單隨手可得的耗材和一般實驗室設備就能製造。順便跟大家講古一下組織餅的歷史，觀古能鑑今～～也許明日就是你改良出第四代的做法，等你跟大家分享！
簡單沈澱法
最早期的組織餅是用簡單沈澱法（simple sedimentation methods），把剩餘的細胞檢體透過離心，沈澱集合成一堆細胞(cell pellet)，但是細胞彼此之間缺乏黏著劑，所以是鬆散的結合（僅靠福馬林或者酒精固定），最後再用竹籤撥動，把這些離心沈澱物從離心管移到濾紙上包起來。
這就很像洗米。懸浮的細胞們就像飄在水中的米一般，漂洗後，把鍋內的水瀝乾，米就像離心後沈澱的細胞們。想像一下抓一把洗好的米去包粽子（包在濾紙中）。如果米很多，抓一把，量很多，剩下一些在鍋內沒有關係，只要粽葉包的緊，在煮粽子的時侯，米不會漏出來；如果米很少，抓一把，量很少，且難免拿不乾淨剩一些在鍋內，放到粽葉內（濾紙）又包不密，所以做出來的量就很少。
所以，主要的困難在細胞量不多時，用沈澱法的細胞間黏著度不強，移來移去會又流失一些，所以做出來的組織餅量很少。
如果是擁有大量胸水或者腹水的檢體，細胞量很多，通常不是問題，這個方法很管用！
但是如果是尿液？細針抽吸剩餘檢體的細胞？那量可就少多了，怎麼辦呢？
所以要改良！布丁三姐弟出場了～～
1986年Olson先生等人，也許是在家有幫忙太太做布丁，所以想到既然我們用實驗室中洋菜膠（agar)做培養皿(布丁)來養細菌。那我們能不能用洋菜膠(agar)來加入細胞沈澱物(cell pellet)，來做個蒟蒻布丁？
這麼一做的確改良了細胞量不足的問題，當時也做一連串的實驗去證實此法有效，改善了在切片上看到的細胞量。但是為什麼今天看不到有人用這個方法呢？
想必一定有些缺點？
因為洋菜膠要呈液態必需保持在一定的溫度（約> 50-60°C)，不然會逐漸固化，但是當洋菜膠(60°C)和細胞沈澱物（室溫：20-30°C)相混合時，兩者體積也許相當（大約各0.1-0.2 mL，這麼少的量，單獨在室溫放著，也會降溫很快)，兩者結合，溫度更會下降很快。因此，還來不及混合兩者均勻，布丁就結塊了，所以咬第一口很多蒟蒻，咬第二口可能沒有蒟蒻。所以，就像孔子講的＂不患寡（少）而患不均＂。
有人問，那為什麼不把洋菜膠加熱到80%以上呢？這樣混合時，溫度也許還在> 50-60%。好方法，算數好，但是洋菜膠太熱會變質！
聰明的商人想到了改良配方！改良版的洋菜膠＂Histogel＂來也～～
改良版的Histogel，主要成份還是洋菜膠，一樣不能高於80°C，但是低到37°C才凝固，可以有充容時間去混合均勻細胞團塊。這是不是為大家解決了困擾呢？沒錯，所以他們賺到錢了！
韓國人出現了，孔子是韓國人？超低溫的洋菜膠登場
課前材料:
預先用BD固定液半固定後的細胞殘量 (Cell pellets of SurePath residues)
超低溫洋菜膠（Ultra-low gelling temperature agarose gel）gelatin?
傳統洋菜膠（Standard agarose gel）
他們發現了用＂Ultra-low gelling temperature agarose gel（ULGT)＂，超低溫才會凝固的洋菜膠。有多低溫呢？< 17°C才凝固，所以不用急著混合細胞和洋菜膠，室溫下不會凝固。所以實驗當中接個電話，沒有問題！
因此，用超低溫洋菜膠來懸浮均勻細胞沈澱物，離心後形成液態的洋菜膠和細胞的混合物。丟棄多餘的上清液中的洋菜膠，放入4°C冰箱固化洋菜膠。洋菜膠果凍和類似AV marker的東西，一起放入Eppendorf的上蓋中，再加入傳統洋菜膠做成一個圓型鈕扣狀的布丁。這樣就大功告成了～～
兩種不同的洋菜膠，聽起來是不是很像包心粉圓呢？
做法聽起有可能有點麻煩，但是有一個好處！
這樣做出來的圖型鈕扣狀的布丁，可以讓細胞檢體也能做成似組織切片的Microarray!
什麼是Microarray?
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| Photo Credit: http://www.nature.com/nrd/journal/v2/n12/full/nrd1254.html |
也許你能再想想，改良出第四代的做法，等你跟大家分享！
Preparation of compact agarose cell blocks from the residues of liquid-based cytology samples. Korean J Pathol. 2014 Oct;48(5):351-60.
(Free access)
Category: Pathology and Forensic Medicine. (2014,Q3)
